羊三联四防魏氏梭菌抗体胶体金测试卡研发成功！-快速兽用检测试剂

前言
什么是羊的三联四防白纬玲？三联四防苗是预防羊快疫、羊猝狙、羊黑疫和羊肠毒血病。
羊快疫主要发生于绵羊。羊突然发病，病程极短，其特征为真胃粘膜呈出血性炎性损害。
羊淬狙是由C型产气荚膜杆菌引起的，以急性死亡为特征，伴有腹膜炎和溃疡性肠炎，1—2岁绵羊易发。
羊黑疫，是由B型诺维氐梭菌引起的绵羊、山羊疾病。本病以肝实质发生坏死病灶为特征。
羊肠毒血症是魏氏梭菌产生毒素所引起的绵羊急性传染病。该病以发病急，死亡快，死后肾脏多见软化为特征。又称软肾病、类快疫。魏氏梭菌又称为产气荚膜杆菌，属梭杆菌属。本菌为厌气性粗大杆菌，革兰氏染色为阳性，在动物体内可形成荚膜，芽胞位于菌体中央。
一、检测原理
采用胶体金免疫层析技术双抗原夹心定量检测D型魏氏梭菌抗体，可用于疫苗免疫效果的质量评估或辅助判断野毒感染情况。检测时，样品中的D型魏氏梭菌抗体与胶体金包被的纯化D型魏氏梭菌抗原结合形成抗原抗体复合物，并沿着试纸流向NC膜的另一端。当该复合物流到膜上的T区时，固定在膜上的另外一个基因工程抗原捕获该复合物并逐渐凝集成一条红色可见的T线，未结合的胶体金标记物流过T区被C区的二抗捕获并形成可见的红色C线。通过测量T线灰度值并经标准曲线校准实现定量检测抗体效价水平。

二、试剂盒组成
1.魏氏梭菌（D型）抗体测试卡：20T（20头份）。
2.说明书：1份。
三、配套仪器
配合本实验室开发的免疫层析定量分析仪（检测箱）等使用。仪器的使用和介绍参见本公众号历史记录（2018PLUS款免疫层析定量分析仪检测箱上市啦!）。

四、待测样品
1.待测样品为血清。采集动物血液按照常规分离血清，血清样品2-8°C可保存7天，长时间保存于-20°C环境下。
2.浑浊、有沉淀或絮状物的样品以及严重溶血的样品不可用。
五、操作步骤
1.测试卡恢复到室温：检测需要在20-30℃下进行，如果测试卡储存在冰箱（2-8℃），在撕开铝箔袋内包装前先在室温环境下平衡至少30分钟，以免吸潮导致测量结果异常。
2.测试卡编号：准备好待检样品后，取出所需的测试卡，并在卡片上标记样本编号。
3.滴加样品反应20分钟：吸取70微升待测血清样品，滴入加样孔，用计时器计时，水平静置20分钟。
4.启动仪器扫描二维码：接通免疫层析分析仪电源，启动仪器，仪器自检结束后，进入主界面。将扫码枪数据线插到免疫层析分析仪背面的USB孔中，听到“滴”声后，用扫码枪扫描试剂盒上的二维码，淘票网进入该项目的检测界面。
5.插卡检测：测试卡反应20分钟结束后，将其插入免疫层析分析仪内（注：加样口朝外），按检测键开始检测，大约5秒钟后仪器显示检测结果。
6.读取检测结果，并记录：若测试卡的C线显色，说明实验有效；否则实验无效，建议重新检测。记录“结果”，必要时可打印检测报告单。

七、结果判定与分析
1.读取血清抗体效价
免疫层析分析仪可自动计算D型魏氏梭菌抗体的效价，如“结果”栏显示90，则判定该份血清的抗体效价为1：90。
注：免疫层析分析仪上分别出现“项目”、“测量值”、“结果”、“提示”四个标识。其中“项目”经扫描枪扫入，“测量值”为样本T线灰度值，“结果”值为样本抗体效价，“提示”为实验是否有效。
2.结果判断
1)效价小于1:32时，判定为D型魏氏梭菌阴性（-）；
2)抗体效价大于或等于1：32时，可为D型魏氏梭菌抗体阳性（+）。这可能与野毒感染有关（如未免疫疫苗）或疫苗抗体（如免疫相应疫苗）
3.抗体水平数据分析方法
疫苗免疫后按照动物种群、胎次和日龄等进行分组分别统计抗体阳性率、整齐度和抗体平均效价。
1)抗体阳性率=阳性数量/总数量*100%。
2)抗体整齐度和抗体平均效价按照下表计算。

4.疫苗免疫效果评估
1)对于免疫效果理想的养殖场而言，抗体整齐度（CV%）≤20%；抗体阳性率≥70%。平均抗体效价大多在64-256之间。
2)有时因为免疫程序、免疫时机不当或者采样数量太少，也会影响抗体整齐度（>20%）。
5.野毒感染判断
1)如抗体整齐度>20%，怀疑可能与野毒感染有关。另外，野毒感染往往会出现异常高值。
2)如未免疫相应疫苗而抗体阳性，推测可能与野毒感染或母源抗体有关。
八、技术说明
1.疫苗免疫是一个复杂的过程，它会受到疫苗质量、免疫程序、免疫时机以及母源抗体等的影响。根据临床检测结果选择合适的免疫程序、免疫时机，选择优秀的疫苗是实现疾病预防控制的关键。